Субкомпартменты ядра - ядрышки
Обновлено: 18.04.2024
Наш организм состоит из триллионов клеток. Большинство из них имеет ядро, некоторые - нет, но это нисколько не умаляет его важности. Мы опросили людей, не занимающихся биологией, как они представляют себе ядро, и объяснили читателю, как оно устроено на самом деле.
"Ядро - это маленькая, очень важное составляющая клетки", - предположила жительница деревни Палатки на берегу реки Угры.
"Ядро - это шарик внутри клетки, который всем управляет. Может быть, оно очень похоже на наше Солнце, вокруг которого кружатся планеты", - ответил восьмилетний мальчик Егор.
Однако это лишь поверхностные представления, потому что ядро очень сложно устроено, и одним предложением его не описать.
В ядре содержится двуцепочечная ДНК, которая несёт наследственную информацию. Ядра бывают разных размеров. Их форма и внешний вид являются факторами, позволяющими различать типы клеток. Так, в нашем организме есть белые кровяные клетки, лейкоциты, у которых на каждой стадии ядро клетки каждого типа выглядит определённым образом, поэтому мы можем распознавать клетки по их ядрам.
Большинство клеток содержит одно ядро, но некоторые имеют несколько или даже не имеют вообще. Многоядерность возникает при многократном делении ядра (кариогенезе), которое происходит, например, у эмбрионов мухи дрозофилы (той самой мелкой мошки, которую вы можете увидеть на долго стоящих фруктах). Некоторые типы дифференцированных клеток, например, зрелые эритроциты (красные клетки крови) млекопитающих, тромбоциты и некоторые клетки хрусталика глаза у позвоночных, напротив, утратили ядро в ходе эволюции.
Благодаря электронному микроскопу мы знаем, что ядро окружено двойной мембраной, или ядерной оболочкой. Внутри есть хорошо видимое в световом микроскопе ядрышко, в котором создаётся рибосомная РНК - важный компонент рибосомы, органоида клетки, занимающегося производством белков. Также в ядрышке расположены гены тРНК, которую можно сравнить с поездом, везущим кирпичи-аминокислоты к месту строительства белков. Кроме того, там находится много белков, не участвующих в образовании рибосом, и функции некоторых из них, как и причины их локализации в ядрышке, пока не известны.
Ещё в ядре было найдено несколько дискретных субкомпартментов (не пугайся, этими страшными словами просто называют чётко отделённые его части). Для их обнаружения использовали антитела (специальные белки, синтезируемые в сыворотке крови и способные избирательно связываться с определёнными молекулами - антигенами), выделенные из сыворотки больных с аутоиммунными заболеваниями (иммунные процессы которых направлены против собственных клеток и тканей). Эти антитела позволили визуализировать дискретные субкомпартменты с помощью флуоресцентных методов (с помощью мечения светящимися молекулами), поскольку они невидимы в световой микроскоп.
Эти части ядра не ограничены мембранами и называются ядерными тельцами. К ним относятсчя точкообразные тельца, тельца Кахаля, тельца Джемини и тельца PML. Их функции настолько сложны и многообразны, что заслуживают отдельной статьи. Многие из этих ядерных телец, как считают учёные, должны отсутствовать в мелких ядрах (например, у таких одноклеточных организмов, как дрожжи). Однако у дрожжей были найдены тельца, напоминающие тельца Кахаля. Возможно, там присутствуют и другие, но из-за того, что их размер существенно меньше, чем в ядрах млекопитающих, их гораздо труднее обнаружить.
Какое же всё-таки ядро "ядрёное"! Вроде маленькое, а столько всего внутри.
Субкомпартменты ядра - ядрышки
Субкомпартменты ядра - ядрышки
• Ядерные субкомпартменты не окружены мембраной
• В ядрышках образуются рРНК и субъединицы рибосом
• Ядрышки содержат ДНК, которая кодирует рРНК и которая присутствует во многих хромосомах
• Факторы сплайсинга иРНК хранятся в ядерных сайтах и мигрируют к местам транскрипции, где проявляют свои функции
• Прочие ядерные тельца могут быть обнаружены с помощью антител, однако функции большинства их неизвестны
Происходящие в ядре ключевые события включают такие этапы экспрессии генов, как транскрипция и процессинг РНК. Эти процессы локализованы в различных ядерных сайтах. Больше всего мы знаем о функциях ядрышек. Описаны и другие субкомпартменты, однако функции их по большей части неизвестны.
Наиболее изученными субкомпартментами ядра являются ядрышки. Большинство клеток содержит по одному ядрышку, однако иногда в клетках находятся по нескольку ядрышек. Ядрышко представляет собой место синтеза и процессинга рРНК, а также сборки субъединиц рибосом. Размеры ядрышек варьируют и определяются особенностями биогенеза рибосом в данной клетке.
Ядрышко содержит все компоненты, необходимые для формирования субъединиц рибосом, и является сайтом эффективной сборки этих структур. К числу необходимых компонентов относятся гены рРНК многих хромосом, сами рРНК, ферменты синтеза и процессинга рРНК, и рибосомные белки, импортируемые из цитоплазмы.
В пределах ядрышка находятся много морфологически-различных областей, что согласуется с представлением о существовании в этом субкомпартменте разных сайтов для транскрипции генов рРНК, ее процессинга и сборки субъединиц.
Хотя ядрышко не имеет мембраны, большая часть белков и РНК, характерных для этой структуры, находится только там и не обнаруживается в других местах ядра. Ядрышко присутствует только в момент сборки субъединиц рибосом. Оно исчезает при ингибировании транскрипции рРНК и появляется вновь при ее возобновлении. Таким образом, считается, что ядрышко образуется в результате объединения генов рРНК, транскрипционных факторов, связанных с промоторами генов рРНК, и молекул РНК-полимеразы I, которая появляется под влиянием факторов транскрипции.
Субкомпартменты ядрышка, видимые в электронном микроскопе.
В свою очередь, вновь синтезированные молекулы рРНК вызывают последовательное появление рибосомальных белков и многих факторов необходимых для сборки субъединиц рибосом. В каком порядке происходят эти процессы, мы не знаем. При вступлении клетки в митоз ядрышко исчезает, а после его завершения снова появляется. Все это также происходит по неизвестному механизму.
Функция ядрышка не ограничивается участием в биогенезе субъединиц рибосом. В ядрышке расположены гены тРНК, происходит их транскрипция и начинается процессинг тРНК. Там также находится много белков, которые не участвуют в образовании субъединиц рибосом. Во многих случаях мы не знаем, почему белки локализованы в ядрышке.
Иногда белки, локализованные в ядре, могут собираться в ядрышке и затем быстро высвобождаться в нуклеоплазму для выполнения своих функций. К числу таких белков относятся некоторые белки, регулирующие клеточный цикл.
Протеомика белков ядрышек культур клеток человека показала, что они содержат более 400 различных полипептидов, и 30% из них представляют собой новые, неохарактеризованные белки.
Также в ядре было обнаружено несколько других небольших дискретных субкомпартментов. Для этого использовали антитела, выделенные из сыворотки больных с аутоиммунными заболеваниями или полученные к специфическим ядерным белкам. Эти антитела позволяют визуализировать дискретные субкомпартменты с помощью флуоресцентных методов и в некоторых случаях при иммуноэлектронной микроскопии, поскольку они невидимы в световом микроскопе. Иногда эти субкомпартменты присутствуют во многих типах эукариотических клеток, они не ограничены мембранами и называются ядерные тельца.
К числу их относятся точкообразные тельца («спеклы»), тельца Кахаля, тельца Джемини и тельца PML. Одна из функций ядерных телец может заключаться в повышении эффективности биологических процессов за счет концентрации в определенном месте всех макромолекул, необходимых для протекания какого-либо процесса.
Факторы сплайсинга сосредоточены в ядерных спеклах.
Более диффузные сайты, в которых можно обнаружить эти факторы, представляют собой сайты процессинга пре-иРНК (слева).
Добавление актиномицина вызывает блок транскрипции (справа).
Спеклы визуализировались методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием антител к b-компоненту фактора сплайсинга U2мяРНП.
Факторы сплайсинга РНК в ядре пространственно организованы в спеклы. На рисунке ниже видно, что факторы сплайсинга не только концентрируются в клетке примерно в 20-50 спеклах, но и расположены во многих местах диффузно. Места диффузного расположения называются интерхроматиновые гранулы. Поскольку спеклы не содержат пре-иРНК, считается, что они служат лишь хранилищами факторов сплайсинга, но не осуществляют сам процесс.
Сплайсинг происходит в диффузных областях, в которых наряду с факторами сплайсинга обнаружена полиаденилированная РНК. На рисунке ниже представлены результаты эксперимента, подтверждающего эту точку зрения Если блокировать транскрипцию ингибитором РНК-полимеразы II, то не наблюдается диффузного распределения факторов сплайсинга, поскольку они перемещаются в спеклы. Когда транскрипция с участием РНК-полимеразы II возобновляется, факторы вновь появляются в областях диффузного распределения.
Некоторые факторы сплайсинга локализованы в других структурах, тельцах Кахаля или спирализованных тельцах. Обычно в ядре находится лишь одно или несколько телец Кахаля, которые часто расположены вблизи ядрышек. Эти тельца содержат белок, который называется коилин и не присутствует в спеклах. Мы знаем, что тельца Кахаля не участвуют в ферментативном сплайсинге, поскольку не содержат пре-иРНК, однако они содержат малые ядерные и малые ядрышковые РНК (мяРНК и мякРНК) и представляют собой сайты посттранскрипционной модификации этих РНК и сборки РНП комплексов.
На рисунке ниже также видно еще одно ядерное тельце Джемини или тельце GEM. Тельца Джемини не обнаружены во всех клетках, и некоторые их компоненты также присутствуют в тельцах Кахаля, что позволяет предполагать, что они могут выполнять сходные функции.
К числу ядерных субкомпартментов относятся тельца PML. Они получили свое название потому, что содержат белок, близкий к впервые обнаруженному у больных промиелоцитарным лейкозом (PML). Впервые PML-тельца были идентифицированы с помощью антител, выделенных из сыворотки крови лейкозных больных. Белок PML, вместе со многими другими белками, образует PML тельца, однако их функция остается невыясненной. Они не участвуют в репликации ДНК, транскрипции и процессинге РНК, а также не являются хранилищем факторов сплайсинга.
Многие из этих небольших ядерных телец, вероятно, отсутствуют в мелких ядрах таких одноклеточных эукариот, как дрожжи. Однако в клетках дрожжей находятся ядерные тельца, напоминающие тельца Кахаля. Возможно, что также присутствуют и другие тельца, однако, поскольку они по размерам существенно меньше, чем в ядрах клеток млекопитающих, их гораздо труднее обнаружить.
Тельца Кахаля и тельца GEM можно обнаружить методом непрямой иммунофлуоресценции с применением антител.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Ядрышки – компонент ядра эукариотической клетки
Ядрышки – обязательный компонент ядра эукариотической клетки. Они наблюдаются в ядрах практически всех клеток, но это правило имеет небольшое количество исключений, которые лишь подчеркивают роль ядрышка в жизненном цикле клетки. К таким исключениям относятся клетки яиц, на стадии дробления, здесь ядрышки отсутствуют на ранних этапах эмбриогенеза, и клетки, которые проходят специализацию, как, например, некоторые клетки крови.
Впервые ядрышки были описаны в конце XIX столетия, когда в научных исследованиях стали активно использоваться разнообразные методы окраски ядра. Настоящий прогресс в этом направлении был достигнут при разработке и использовании в цитологии специальных ядрышковых красителей и методов, связанных с применением азотнокислого серебра [1, 2]. В шестидесятых годах прошлого столетия было показано, что ядрышко является основным местом биогенеза рибосом. С этого времени ядрышки стали объектом многих исследований.
В клеточном цикле ядрышки, присутствуют в течение всей интерфазы; в период митоза, в профазе, во время компактизации хромосом, они постепенно исчезают. В метафазе и анафазе ядрышки отсутствуют. Первые признаки новых ядрышек появляются после стадии средней телофазы, когда уже достаточно разрыхлились хромосомы дочерних ядер. В это время близ хромосом, которые деконденсируются, появляются плотные тельца – первичные ядрышки [3]. Обычно, их количество больше, чем в интерфазе. Позднее, в G1-периоде клеточного цикла первичные ядрышки растут, начинают объединяться одно за другим, их общее количество уменьшается, но возрастает объем. Общий объем ядрышка увеличивается вдвое в S- G2- периодах клеточного цикла [4].
Образование ядрышек топографически связано с определенными зонами на ядрышкообразующих хромосомах. Эти зоны называются ядрышковыми организаторами, или ядрышкообразующими районами (ЯОР) хромосом, которые локализованы в области вторичных перетяжек хромосом. В интерфазных ядрах в структуре ядрышка выделяют следующие составляющие: фибриллярные центры, плотный фибриллярный и гранулярный компоненты, ядрышковые вакуоли, и ассоциированный с ядрышком хроматин [4, 5]. Фибриллярные центры окружены плотными фибриллярными и гранулярными компонентами и содержат расплетенную рДНК и рассматриваются как интерфазные “двойники” митотических ЯОР [6]. Исследования последних лет показали, что число и размеры фибриллярных центров существенно варьирует в клетках, и зависит от их (клеток) функционального состояния, в частности, от интенсивности транскрипции рДНК [5, 7]. Что касается гранулярного компонента ядрышка, то принята точка зрения, что он, прежде всего, представлен дозревающими прерибосомами [4, 5]. В состав ядрышка входят также ферменты: РНК-полимераза-1, РНК-метилаза, топоизомераза-1; ядрышковые протеины, наиболее изученными из которых являются нуклеолин, протеины Р80 и Р105, и фосфопротеины С23 и Р100, все они локализуются преимущественно в зоне фибриллярного центра [4, 7]. На протяжении последних лет в ядрышках идентифицировано более чем 400 белков. Исследования молекулярного строения и содержимого ядрышек продолжаются сегодня и помогают понять широкий спектр ядрышковых функций.
Ядрышко представляет собой комплекс амплифицированных генов рРНК и продуктов – предшественников рибосом, и является источником основной массы цитоплазматической РНК, представленной, главным образом, рибосомной РНК.
Структурная организация ядрышка тесно связана с его функциональной активностью, и зависит от интенсивности транскрипции рДНК, скорости процессинга и выхода зрелых субъединиц рибосом из ядрышка в нуклеоплазму [4]. Поэтому, когда транскрипция и/или обработка рРНК замедлены, ядрышко частично, или полностью теряет структурную целостность. Когда транскрипция блокирована, отмечают сегрегацию ядрышковых компонентов [8]. Когда обработка и созревание рРНК ослаблены, но транскрипция рДНК все еще активна, т.е. когда утрачена связь между транскрипцией рДНК и обработкой рРНК, наблюдают рассеивание ядрышек по всей кариоплазме.
Лабильность морфологических показателей ядрышка (числа, формы, размера, микроскопического строения) считают одним из основных его функциональных свойств [4, 5]. Изменчивость морфологических и химических свойств ядрышек определяется основной их функцией – синтезом клеточной РНК, которая была отмечена Т. Касперсоном [2]. Им было показано, что количество РНК и белка в цитоплазме зависит от объема ядрышка и концентрации в нем РНК. Этот вывод позволяет связать изменения морфологических параметров ядрышек с метаболическими особенностями синтеза РНК и белка в клетке. Так, клетки, которые синтезируют большое количество белка, имеют большое ядрышко или много ядрышек [1, 6]. В малоактивных клетках ядрышко маленькое или его вообще тяжело обнаружить. При обычной функциональной нагрузке, которая отвечает нуждам определенной популяции клеток, структура ядрышка остается практически неизменной. Но в ходе клеточного цикла, в процессе дифференцирования и дедифференцирования, при угнетении или активации синтеза рРНК происходят значительные перестройки ядрышка [4].
Согласно литературным данным количество ядрышек в клетке может изменяться, но их число зависит от генного баланса клетки. Он определяется числом ядрышковых организаторов и увеличивается согласно плоидности ядра [1, 7]. Чаще всего в клетках количество ядрышек меньше, чем число ядрышковых организаторов. Это связано с тем, что при новообразовании они могут сливаться одно с другим, таким образом, в образовании одного ядрышка принимают участие несколько ядрышкообразующих районов (ЯОР) хромосом.
Чаще всего для визуализации ядрышек используется методика Ховела и Блэка [12] – она отличается от других применением коллоида желатина, который выступает в качестве стабилизатора и катализатора реакции, которая проходит в слабокислой среде. Разработаны многочисленные модификации данного метода, позволяющие использовать его при исследовании клеток и тканей, разнообразных организмов [13].
Экспериментальные исследования показали, что реакция серебрения базируется на выборочном связывании нитрата серебра с негистоновыми белками хромосом, которые образуют рибонуклеопротеиновые комплексы из только что синтезированной рРНК. Считают, что в ходе реакции происходит восстановление ионов Ag + до металлического серебра, однако при этом нет единой точки зрения относительно того, какие компоненты белков осуществляют процесс восстановления ионов. Наибольшую родственность к серебру проявляют сульфгидрильные и карбоксильные группы [14]. Есть мнение, что взаимодействие с серебром может осуществляться за счет фосфатных групп, которые связаны с серином и треонином в фосфорилированных белках [13].
При окраске препаратов интерфазных клеток методом Ховела и Блека, ядрышковые организаторы видны в виде черных точек (гранул) на желтом фоне ядер или слабоокрашенных хромосом. Сами ядрышки в интерфазных ядрах окрашиваются в коричневый цвет. Специфичность окраски достигается лишь при соблюдении определенных условий (рН, температуры, времени окрашивания и концентрации AgNO3). В связи с тем, что родственность к серебру проявляют практически все компоненты хроматина, изменение условий проведения реакции ведет к выявлению, кроме ЯОР, других структур. Так, при более продолжительном крашении азотнокислым серебром проявляются центромеры хромосом и центриоли [15].
Микрофотография. Ядрышки в клетках плавника рыб и в клетках гидры. Увеличение 10х100. Окраска азотнокислым серебром.
Нитратом серебра окрашиваются лишь те ядрышковые организаторы, которые в данный момент активно функционируют [14, 15]. Поэтому данный метод не только позволяет выявить ЯОР, но и дает возможность оценить функциональное состояние рыбосомных генов в клетке.
Степень аргентофильности ядрышек тесно связана с пролиферативным потенциалом клеток и уровнем их дифференцирования. Это дает возможность использовать явление аргентофильности ядрышек для изучения роста, дифференцирования и других клеточных процессов, при которых происходит изменение функционального состояния клетки, опосредствованное вариацией функциональной активности рыбосомных генов [13]. Вывод о том, что азотнокислым серебром окрашиваются лишь активные ЯОР, получил подтверждение в экспериментах по искусственному усилению и угнетению синтеза рРНК, эмбриогенеза у мышей и птиц, гаметогенеза у млекопитающих, в том числе и человека [14]. С помощью иммуноцитогенетических методов показано, что интерфазные ядрышки и хромосомные ЯОР млекопитающих, которые окрашиваются серебром, прямо отражают транскрипционную активность генов рРНК [15]. Показано, что способность определенного сайта данной хромосомы окрашиваться серебром постоянна у данного индивидуума, но существуют индивидуальные вариации в числе и распределении ЯОР, что заметно при крашении азотнокислым серебром. Установлено, что способность данного сайта окрашиваться серебром или, другими словами, способность данной хромосомы образовывать ядрышко передается наследственно. В связи с этим метод окраски азотнокислым серебром успешно применяют в кариосистематике.
Имеется много работ посвященных изучению изменения ядрышковых характеристик растительных и животных организмов в разных условиях, при влиянии естественных и антропогенных факторов [16].
Показано изменение структуры ядрышек под воздействием цитостатических препаратов в культуре клеток и в экспериментах на лабораторных животных [18]. Авторы отмечают, что данные эффекты характерны для агентов, которые угнетают транскрипцию и процессинг рРНК, блокируют обособление прерыбосом от ядрышка.
Показано увеличение объема ядрышкового материала в клетках растений при воздействии неблагоприятных экологических условий [19]. Более высокую активность ядрышкового аппарата в условиях естественной и антропогенной нагрузок связывают с действием адаптивных механизмов в условиях экстремальности, вызванной природными и антропогенными факторами.
Отмечено влияние малых доз ионизирующей радиации на ядрышковый аппарат зародышей карпа [20]. Показано стимулирующее свойство низких концентраций некоторых мутагенных факторов на гонады рыб и ооциты млекопитающих, следствием, которого является образование большого количества дополнительных ядрышек и усиление биосинтеза белка [21].
При исследовании влияния растворов солей кадмия и хрома на клетки жабр и гепатоцитов рыб Odontesthes bonariensis, показано значительное изменение объема ядрышек в этих клетках в зависимости от концентрации тяжелых металлов [22]. В экспериментах по влиянию растворов кадмия на клетки представителя миксомицет, Physarum polycephalum, отмечено изменение структуры ядрышка, описана его сегрегация, появление множественных ядрышкоподобных телец в ядре и образование кольцевидного ядрышка, при этом наблюдалось значительное снижение синтеза РНК [23]. Подобные изменения наблюдались и при влиянии кадмия на клетки корневой меристемы лука [24]
Приведенный выше обзор, позволяет заключить, что ядрышко – это обязательная структура ядра интерфазной клетки, оно занимает одно из центральных мест в синтезе белка клеткой, и отображает как уровень биосинтетической активности клетки на разных стадиях клеточного цикла, так и функциональное состояние клетки в нормальных условиях и в условиях патологии, или влияния токсичных веществ и других факторов.
Литература:
Фотоматериалы из личного архива автора.
Веялкина Наталия Николаевна
© Наталия Веялкина, кандидат биологических наук, заведующая лабораторией экспериментальных биологических моделей
Ядрышковые организаторы
клеточного ядра с ядрышком. Ядрышковые организаторы (Nucleolus organizer regions, NOR) — участки хромосом, образующие внутри ядра клетки так называемое ядрышко.
UBTF (upstream binding transcription factor, RNA polymerase I, другие названия UBF; UBF1; UBF2; UBF-1; NOR-90) — ядрышковый транскрипционный фактор, регулирующий транскрипцию генов рРНК и ряд других процессов.
Клеточное ядро
интерфазе, и у них окрашено всё ядро. Левая клетка претерпевает митоз, поэтому ДНК конденсирована и окрашено не всё ядро Кле́точное ядро́ (nucleus) — окружённый двумя мембранами компартмент эукариотической клетки (в клетках прокариот ядро отсутствует).
Фибрилларин
Фибриллари́н (Fibrillarin, Fbl, другие названия см. ниже) — ядрышковый белок, у человека кодируется геном FBL, локализованным на 19-й хромосоме.
Ядрышко
клеточного ядра с ядрышком Я́дрышко — немембранный внутриядерный субкомпартмент, присущий всем без исключения эукариотическим организмам.
Ядерные тельца
Я́дерные тельца́ (nuclear bodies) — субкомпартменты внутри ядра, не окружённые мембранами, но представляющие собой отдельные, морфологически различимые комплексы белков и РНК.
Гетерохроматин
тельца БарраГетерохромати́н — участки хроматина, находящиеся в течение клеточного цикла в конденсированном (компактном) состоянии.
Перенаправления здесь:
Юнионпедия это понятие карту или семантическая сеть организована как энциклопедия или словарь. Это дает краткое определение каждому понятию и его отношений.
Это гигантский онлайн ментальная карта, которая служит в качестве основы для концептуальных диаграмм или синтетических фотографий. Это бесплатно в использовании и каждый элемент или документ может быть загружен. Это инструмент, ресурс или ссылка для изучения, исследования, образование, обучение, учителя могут использовать, учителей, профессоров, преподавателей, учеников или студентов; или школа для академического мира, в школу, начальное, среднее, средней, колледж, технической степени, университет, студентов, магистров или докторские степени; для бумаг, отчетов, документов, проектов, идей, документации, резюме, обследований или диссертации. Вот определение, объяснение, описание, или смысл каждого значительным, на котором вам нужна информация, а также список или перечень соответствующих концепций, как кажется глоссарий. Доступна на русский, английский, испанский, португальский, японский, китайский, французский, немецкий, итальянский, польский, нидерландский, арабский, хинди, шведский, украинский, венгерский, каталанский, чешский, иврит, датский, финский, индонезийский, Норвежский, румынский, турецкий, вьетнамский, корейский, тайский, греческий, болгарский, хорватский, словацкий, литовский, филиппинский, латышский, эстонский и словенский. Другие языки в ближайшее время.
Вся информация была извлечена из Википедия, и это доступно в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution-ShareAlike.
Google Play, Android и логотип Google Play являются товарными знаками корпорации Google Inc.
Характеристика ядрышкового антигена клеток человека, выявляемого новым моноклональным антителом
1.1. Структура и функции ядрышка
1.2. Реакции клетки и ядрышка на стрессовые воздействия
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Клетки.
2.2. Антитела.
2.3. Воздействие ингибиторов
2.4. Методы исследования
2.4.1. Реакция непрямой иммунофлуоресценции.
2.4.2. Выявление фрагментации ДНК методом Т1МЕЬ.
2.4.3. Мечение клеток Вгс1и.
2.4.4. Выявление аргентофильных белков
2.4.5. Выявление микрофиламентов
2.4.6. Обработка РНКазой А и пепсином.
2.4.7. Иммуноблотинг
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Основная характеристика антигена, выявляемого новым моноклональным антителом АЗ.
3.1.1. Оптимизация условий выявления АЗ антигена
3.1.2. Определение видовой специфичности МКА АЗ.
3.1.3. Локализация антигена АЗ в интерфазных и митотических клетках.
3.1.4. Особенности распределения антигена АЗ в ядрышках клеток различных культур.
3.2. Реакция АЗ антигена на действие ингибиторов белкового
синтеза .
3.2.1. Влияние ингибитора белкового синтеза анизомицина на локализацию АЗ антигена в клетках различного тканевого происхождения
3.2.2. Влияние различных ингибиторов белкового синтеза на локализацию АЗ антигена в клетках НеЬа.
3.2.3. Реакция клеток на ингибирование белкового синтеза в зависимости от стадии клеточного цикла
3.2.4. Выявление Абелков после действия анизомицина
3.2.5. Выявление фрагментации хроматина методом ТЖЕЬ
3.2.6. Структура актинового цитоскелета в клетках НеЬа, обработанных
анизомицином.
3.2.7. Колокализация АЗ с другими ядрышковыми белками после инкубации с
анизомицином.
3.3. Выявление аномальной локализации АЗ антигена при
длительном культивировании клеток НеЬа.
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Работа выполнена в лаборатории клинической иммунологии Гематологического научного центра РАМН зав. Т.И. Булычева и в лаборатории структурной биохимии Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю. А.Овчинникова РАН зав. О.В. Зацепина
ГЛАВА I. В интерфазном ядре хромосомные территории отделены друг от друга межхроматиновым пространством, которое включает в себя ряд ядерных структур, таких как ядрышки, тельца Кахала, скопления интерхроматиновых гранул и некоторые другие субкомпартменты ii , , i v, . Эти структуры содержат комплексы белков и рибонуклеопротеины и не отделены мембранами от окружающей их нуклеоплазмы. Наиболее хорошо изученным ядерным субкомпартментом является ядрышко. Это наиболее выраженный субкомпартмснт ядра, в котором во время интерфазы происходят процессы транскрипции рибосомной ДНК рДНК, кодирующей , , 5. РНК, процессинг первичных транскриптов прерРНК и сборка прерибосом v . У высших позвоночных каждая единица транскрипции рибосомных генов состоит из следующих элементов энхансеры, промотор, точка начала репликации, терминатор транскрипции, последовательности, кодирующие , , 5. РНК, i, . Послеювательности промоторов рибосомных генов разных таксономических классов сильно отличаются друг от друга. Транскрипционный аппарат одного таксономического класса обычно в общем случае не распознает промотор другого класса ix , . Промотор рДНК состоит из следующих элементов i xi и . Стерсоспецифичное расположение этих элементов необходимо для эффективной инициации транскрипции.
Рекомендуемые диссертации данного раздела
| Название работы | Автор | Дата защиты |
|---|---|---|
| Восстановление лимфоцитов периферической крови у пациентов с гематологическими заболеваниями после аллогенной неродственной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток | Вавилов, Владимир Николаевич | 2006 |
| Пути коррекции эритроцитарного звена гемостаза у больных острым деструктивным панкреатитом | Мурасов, Дамир Галиевич | 2005 |
| Эффективность лечения подростков и лиц молодого возраста с острым лимфобластным лейкозом по протоколам ALL-BFM-90m и ALL-МВ-91 | Трипутень, Наталия Захаровна | 2004 |
Читайте также: