Эпидермальный стафилококк. Staphylococcus epidermidis. Факторы патогенности эпидермального стафилококка. Микробиологическая диагностика эпидермального стафилококкаd.

Обновлено: 01.05.2024

Введение . Среди инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи, значительное место занимают стафилококковые. Возбудителями воспалительных процессов у новорожденных часто выступают коагулазонегатив­ные стафилококки, ведущая роль среди которых принадлежит S. epidermidis и S. haemolyticus . В связи с этим представ­ляется актуальным исследование циркуляции данных микроорганизмов в педиатрических стационарах с помощью внутривидового дифференцирования, основанного на сопоставлении спектров их внеклеточных белков. Цель исследования – изучение циркуляции штаммов S. epidermidis и S. haemolyticus в детском стационаре методом электрофоре­типирования их внеклеточных белков. Материалы и методы. Исследованы 277 штаммов S. haemolyticus и 267 штаммов S. epidermidis , выделенных в детском стационаре от больных и с предметов окружающей среды. Получены внекле­точные белки изолятов, проведен их электрофоретический анализ в полиакриламидном геле. Определена антибио­тикорезистентность и способность к формированию биопленки. Результаты. Анализ электрофореграмм внеклеточ­ных белков стафилококков позволил выявить группы идентичных штаммов. Изоляты от разных пациентов были объединены в 21 группу S. haemolyticus , включающую 69 штаммов, и 13 групп S. epidermidis , включающих 38 штаммов. Все эти культуры были метициллинрезистентными, за исключением одной группы из двух штаммов S. haemolyticus . Более половины культур, сгруппированных по спектрам внеклеточных белков, были полирезистентны. Абсолютное большинство штаммов S. haemolyticus (97,2 %) и три четверти штаммов S. epidermidis (76,0 %) обладали способностью к формированию биопленки. Средние значения степени пленкообразования у штаммов S. haemolyticus были достовер­но выше, чем у S. epidermidis . Выводы. Из всех исследованных культур стафилококков 25 % штаммов S. haemolyticus и 14 % S. epidermidis длительно циркулировали в детском стационаре, из них 88,4 % штаммов гемолитического и 42,1 % эпидермального стафилококка – более месяца, а 21,7 % штаммов S. haemolyticus и 21,1 % S. epidermidis – в течение года. Эти культуры отличались метициллинрезистентностью, а изоляты гемолитического стафилококка – высокой способностью к образованию биопленки.

Ключевые слова

Об авторах

ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора
Россия

Беляева Елена Вячеславовна – к.б.н., ст. наун. сотр., вед. науч. сотр. лаборатории микробиологии

ул. Малая Ямская, д. 71, г. Нижний Новгород

ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора
Россия

Ермолина Галия Бариевна – к.б.н., ст. науч. сотр. лаборатории микробиологии

ул. Малая Ямская, д. 71, г. Нижний Новгород

ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора
Россия

Борискина Елена Владимировна – мл. науч. сотр. лаборатории микробиологии

ул. Малая Ямская, д. 71, г. Нижний Новгород

ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора
Россия

Шкуркина Ирина Сергеевна – мл. науч. сотр. лаборатории микробиологии

ул. Малая Ямская, д. 71, г. Нижний Новгород

ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора
Россия

Кропотов Василий Сергеевич – к.б.н., ст. науч. сотр. лаборатории микробиологии

ул. Малая Ямская, д. 71, г. Нижний Новгород

Список литературы

2. Присакарь В.И., Буга Д.В., Сава В.И. Внутрибольничные инфекции, вызванные метициллинрезистентными стафилококками (MRS) // Журнал МедиАль. 2018. № 2. С. 8–11.

5. Любасовская Л.А., Корниенко М.А., Припутневич Т.В., Ильина Е.Н., Щеголев А.И. Микробиологическая и молекулярно-генетическая характеристика коагулазонегативных стафилококков, выделенных у новорождённых отделения реанимации и интенсивной терапии // Антибиотики и химиотерапия. 2013. Т. 58. № 3-4. С. 25–32.

6. Rampelotto RF, Lorenzoni VV, Silva DDC, et al. Assessment of different methods for the detection of biofilm production in coagulase-negative staphylococci isolated from blood cultures of newborns. Rev Soc Bras Med Trop. 2018;51(6):761–767. doi: 10.1590/00378682-0171-2018

7. Шайхразиева Н.Д., Булычева И.А., Лопушов Д.В., Сабаева Ф.Н. Этиологическая структура и антибиотикорезистентность госпитальных штаммов микроорганизмов в отделении анестезиологии и реанимации // Медицинский альманах. 2019. № 1 (58). С. 32–34.

8. Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Борискина Е.В., Кряжев Д.В., Шкуркина И.С. Мониторинг биопленкообразующей способности у циркулирующих в детском стационаре коагулазонегативных стафилококков // Медицинский альманах. 2018. № 4 (55). С. 26–30.

9. Брико Н.И., Брусина Е.Б., Зуева Л.П., Ковалишена О.В., Ряпис Л.А., Стасенко В.Л. и др. Госпитальный штамм – непознанная реальность // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2013. № 1 (68). С. 30–35.

10. Shrestha LB, Bhattarai NR, Khanal B. Antibiotic resistance and biofilm formation among coagulasenegative staphylococci isolated from clinical samples at a tertiary care hospital of eastern Nepal. Antimicrob Resist Infect Control. 2017;6:89. doi: 10.1186/s13756-017-0251-7

12. Rajivgandhi G, Maruthupandy M, Muneeswaran T, Anand M, Quero F, Manoharan N, et al. Biosynthesized silver nanoparticles for inhibition of antibacterial resistance and biofilm formation of methicillin-resistant coagulase negative Staphylococci. Bioorg Chem. 2019;89:103008. doi: 10.1016/j.bioorg.2019.103008

13. França A, Gaio V, Lopes N, Melo L. Virulence factors in coagulase-negative staphylococci. Pathogens. 2021;10(2):170. doi: 10.3390/pathogens10020170

15. Кузнецова М.В., Николаева Н.В., Розанова С.М., Карпунина Т.И. Формирование биопленок нозокомиальными штаммами Pseudomonas aeruginosa // Журнал Микробиологии, Эпидемиологии и Иммунобиологии. 2011. № 4. С. 8–14.

16. Гостев В.В., Калиногорская О.С., Круглов А.Н., Сидоренко С.В. Антибиотикорезистентность коагулазоотрицательных стафилококков, выделенных в стационарах Санкт-Петербурга и Москвы // Антибиотики и химиотерапия. 2015. Т. 60, № 9-10. C. 23–28.

17. Петрухина М.И., Мартынова А.М., Политова Н.Г., Ющенко Г.В., Старостина Н.В. Сравнительный анализ микроорганизмов, выделенных от больных в отделениях реанимации разного профиля // Медицинский альманах. 2016. № 3 (43). С. 17–20.

18. Граничная Н.В., Зайцева Е.А., Пятко В.Э. Микробиологический мониторинг и антибиотикорезистентность коагулазонегативных стафилококков, выделенных от пациентов кардиохирургического стационара // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2017. № 1 (68). С. 24–29.

19. Bora P, Datta P, Gupta V, Singhal L, Chander J. Characterization and antimicrobial susceptibility of coagulase-negative staphylococci isolated from clinical samples. J Lab Physicians. 2018;10(4):414–419. doi: 10.4103/JLP.JLP_55_18

20. Омарова С.М., Алиева С.Ф., Османов А.С. Мониторинг антибиотикорезистентных стафилококков, возбудителей внутрибольничного инфицирования пациентов отделения челюстно-лицевой хирургии // Международный научно-исследовательский журнал. 2017. № 2-2 (56). С. 30–33.

21. Salgueiro VC, Iorio NL, Ferreira МС, Chamon RC, Santos KR. Methicillin resistance and virulence genes in invasive and nasal Staphylococcus epidermidis isolated from neonates. BMC Microbiol. 2017;17(1):15. doi: 10.1186/s12866-017-0930-9

24. Leclercq R, Cantón R, Brown DFJ, Giske CG, Heisig P, MacGowan AP, et al. EUCAST expert rules in antimicrobial susceptibility testing. Clin Microbiol Infect. 2013;19(2):141-60. doi: 10.1111/j.1469-0691.2011.03703.x

25. Зырянов С.К., Сычев И.Н., Гущина Ю.Ш. Современные проблемы инфекций, вызванных MRSA и пути их решения // Антибиотики и химиотерапия. 2017. Т. 62. № 7-8. С. 69–79.

26. Сергевнин В.И., Клюкина Т.В., Зуева Н.Г., Волкова Э.О. Устойчивость к дезинфицирующим средствам госпитального штамма Staphylococcus haemolyticus, выделенного в акушерском стационаре при неединичной заболеваемости новорожденных гнойно-септическими инфекциями // Здоровье населения и среда обитания. 2012. № 7 (232). С. 18–20.

27. Белова Е.О. Биопленочные инфекции в педиатрии // Бюллетень медицинских Интернет-конференций. 2019. Т. 9. № 12. С. 574–576.

28. Беляева Е.В., Ермолина Г.Б., Шкуркина И.С., Борискина Е.В., Кряжев Д.В. Оценка чувствительности к дезинфектантам коагулазонегативных стафилококков, циркулирующих в детском стационаре // Здоровье населения и среда обитания. 2019. № 8 (317). С. 20–24.

29. Kitti T, Seng R, Thummeepak R, Boonlao C, Jindayok T, Sitthisak S. Biofilm formation of methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci isolated from clinical samples in Northern Thailand. J Global Infect Dis. 2019;11(3):112–117. doi: 10.4103/jgid.jgid_118_18

30. Корниенко М.А., Копыльцов В.Н., Шевлягина Н.В. Диденко Л.В., Любасовская Л.А., Припутневич Т.В. и др. Способность стафилококков различных видов к образованию биопленок и их воздействие на клетки человека // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2016. Т. 34. № 1. С. 18–25.

Рецензия

При поддержке: исследование проводилось в рамках целевой научно-исследовательской программы 2016–2020 «Проблемно-ориентированные научные исследования в области эпидемиологического надзора за инфекционными и паразитарными болезнями».

Для цитирования:

For citation:


Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.

1.Эпидермальный стафилококк. Staphylococcus epidermidis. Факторы патогенности эпидермального стафилококка. Микробиологическая диагностика эпидермального стафилококка.

Эпидермальные стафилококки ( Staphylococcus epidermidis ) колонизируют гладкую кожу и поверхность слизистых оболочек и обычно слабо вирулентны. Подавляющее большинство инфекций носит госпитальный характер, их чаще выявляют у пациентов с пониженной резистентностью (табл. 12-1). Типичными для эпидермаль-ного стафилококка считают поражения, обусловленные инфицированием различных устройств (протезов, катетеров, дренажей) либо гематогенным диссеминированием возбудителя после хирургических вмешательств. Например, он вызывает до 50% эндокардитов у больных с протезированными клапанами сердца. Достаточно часто микроорганизм обусловливает поражения мочевыводящей системы (особенно у лиц старше 50 лет с различными формами урологической патологии в анамнезе) и суставные инфекции, чаще развивающиеся не позднее 1 года после имплантации протеза (50% всех случаев).

Факторы патогенности эпидермального стафилококка.Способность вызывать поражения обусловливают гидрофобные свойства поверхности эпидермального стафилококка, облегчающие адгезию к субстратам, и поверхностный полисахарид-ный слизистый слой, предохраняющий бактерию от действия микробицидных и цитотоксических агентов. Подобно поражениям, вызываемым S. aureus, важное патогенетическое значение имеют компоненты клеточной стенки S. epidermidis, стимулирующие развитие воспалительных реакций и оказывающие многостороннее действие на ткани. Микробиологическая диагностика эпидермального стафилококка.Микроскопия окрашенных мазков клинического материала эпидермального стафилококка позволяет выявить скопления грамположительных кокков и полиморфно-ядерных лейкоцитов. Микроорганизм не проявляет гемолитической активности, на КА образует беловатые гладкие выпуклые колонии (см. рис. 1 на вклейке). Основное отличие от S. aureus— отсутствие коагулазной активности. Выделенные коагулаза-отрицательные стафилококки следует дифференцировать от других стафилококков, иногда выделяемых из мочи (например, S. saprophyticus). Для дифференцировки учитывают их резистентность к новобиоцину (МИК более 1,6мкг/мл), к которому S. epidermidis чувствителен. Следует помнить о появлении и увеличении удельного веса метициллин-резистентных штаммов эпидермального стафилококка (MRSE). Они обычно чувствительны к ванкомицину, особенно в комбинации с гентамицином и рифампицином.

2.Факторы патогенности стрептококков.

1. Белок М- главный фактор. Определяет адгезивные свойства, угнетает фагоцитоз, определяет типоспецифичность, обладает свойствами суперантигена. Антитела к М- белку обладают протективными свойствами.

2. Капсула - маскирует стрептококки за счет гиалуроновой кислоты, аналогичной гиалуроновой кислоте в тканях хозяина.

3. С5а - пептидаза - расщепляет С5а - компонент комплемента, чем снижает хемоатрактивную активность фагоцитов.

4. Стрептококки вызывают выраженную воспалительную реакцию, в значительной степени обусловленную секрецией более 20 растворимых факторов - ферментов (стрептолизины S и О, гиалуронидаза, ДНК- азы, стрептокиназа, протеазы) и эритрогенных токсинов.

Эритрогенин - скарлатинозный токсин, обусловливающий за счет иммунных механизмов образование ярко красной скарлатинозной сыпи. Выделяют три серологических типа этого токсина (А,В и С). Токсин обладает пирогенным, аллергенным, иммуносупрессивным и митогенным действием.

Генетика. Мутации и рекомбинации менее выражены, чем у стафилококков. Способны синтезировать бактериоцины. Фаги для дифференциации не применяют.

Эпидемиологические особенности и Клинико - патогенетические особенности стрептококков.

Основными источниками являются больные острыми стрептококковыми инфекциями (ангина, пневмония, скарлатина), а также реконвалесценты. Механизм заражения - воздушно - капельный, реже - контактный, очень редко - алиментарный.Стрептококки - обитатели слизистых верхних дыхательных путей, пищеварительного и моче - полового трактов, вызывают различные заболевания эндо- и экзогенного характера. Выделяют локальные (тонзиллит, кариес, ангины, отиты и др.) и генерализованные инфекции (ревматизм, рожистое воспаление, скарлатина, сепсис, пневмония, стрептодермии и др.). Развитие тех или иных форм зависит от ряда условий, в т.ч. от входных ворот, различных факторов патогенности, состояния иммунной системы (особую роль играют антитоксины и типоспецифические М- антитела).Особое положение в роде Streptococcus занимает вид S.pneumoniae (пневмококк) - этиологический агент крупозной пневмонии, острых и хронических воспалительных заболеваний легких. От остальных стрептококков отличается морфологией (чаще диплококки в форме пламени свечи, плоскими концами друг к другу, обладают выраженной капсулой), антигенной специфичностью (имеют 83 серовара по капсульному полисахаридному антигену), высокой чувствительностью к желчи и оптохину, вызывают альфа - гемолиз. Главный фактор патогенности - полисахаридная капсула.Скарлатину вызывают различные серотипы бета - гемолитических стрептококков, обладающих М- антигеном и продуцирующих эритрогенин (токсигенные стрептококки серогруппы А). При отсутствии антитоксического иммунитета возникает скарлатина, при наличии - ангина.

Эпидермальный стафилококк. Staphylococcus epidermidis. Факторы патогенности эпидермального стафилококка. Микробиологическая диагностика эпидермального стафилококкаd.

Эпидермальный стафилококк. Staphylococcus epidermidis. Факторы патогенности эпидермального стафилококка. Микробиологическая диагностика эпидермального стафилококка.

Эпидермальные стафилококки ( Staphylococcus epidermidis ) колонизируют гладкую кожу и поверхность слизистых оболочек и обычно слабо вирулентны. Подавляющее большинство инфекций носит госпитальный характер, их чаще выявляют у пациентов с пониженной резистентностью (табл. 12-1).
Типичными для эпидермального стафилококка считают поражения, обусловленные инфицированием различных устройств (протезов, катетеров, дренажей) либо гематогенным диссеминированием возбудителя после хирургических вмешательств. Например, он вызывает до 50% эндокардитов у больных с протезированными клапанами сердца.
Достаточно часто микроорганизм обусловливает поражения мочевыводящей системы (особенно у лиц старше 50 лет с различными формами урологической патологии в анамнезе) и суставные инфекции, чаще развивающиеся не позднее 1 года после имплантации протеза (50% всех случаев).

Факторы патогенности эпидермального стафилококка

Способность вызывать поражения обусловливают гидрофобные свойства поверхности эпидермального стафилококка, облегчающие адгезию к субстратам, и поверхностный полисахарид-ный слизистый слой, предохраняющий бактерию от действия микробицидных и цитотоксических агентов. Подобно поражениям, вызываемым S. aureus, важное патогенетическое значение имеют компоненты клеточной стенки S. epidermidis, стимулирующие развитие воспалительных реакций и оказывающие многостороннее действие на ткани.

Микробиологическая диагностика эпидермального стафилококка

Микроскопия окрашенных мазков клинического материала эпидермального стафилококка позволяет выявить скопления грамположительных кокков и полиморфно-ядерных лейкоцитов. Микроорганизм не проявляет гемолитической активности, на КА образует беловатые гладкие выпуклые колонии. Основное отличие от S. aureus — отсутствие коагулазной активности.
Выделенные коагулаза-отрицательные стафилококки следует дифференцировать от других стафилококков, иногда выделяемых из мочи (например, S. saprophyticus). Для дифференцировки учитывают их резистентность к новобиоцину (МИК более 1,6мкг/мл), к которому S. epidermidis чувствителен. Следует помнить о появлении и увеличении удельного веса метициллин-резистентных штаммов эпидермального стафилококка (MRSE). Они обычно чувствительны к ванкомицину, особенно в комбинации с гентамицином и рифампицином.

Эпидермальный стафилококк. Staphylococcus epidermidis. Таблица 12-1. Основные инфекционные заболевания человека, вызываемые стафилококками

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Биологические особенности S.epidermidis у пациентов кардиохирургического стационара

Цель исследования: проанализировать роль эпидермального стафилококка в развитии инфекционных осложнений у кардиохирургических пациентов. Материалы и методы: Исследовано 23 штамма Staphylococcus epidermidis, выделенных за 7 месяцев 2014 года из биологического материала от пациентов кардиохирургического стационара , 78 штаммов с объектов окружающей среды, и 45 штаммов изолированных из зева и носа медицинского персонала. Выделение, идентификация культур и чувствительность к антибиотикам проводились с помощью микробиологического анализатора Vitek 2 compact. Метициллинрезистентность стафилококков определялась по наличию гена mecA с помощью анализатора Vitek 2 compact. Статистическая обработка проводилась с помощью программного обеспечения «Система микробиологического мониторинга «Микроб-2». Результаты: Анализ бактериологического пейзажа показывает, что среди нозокомиальных стафилококков, доля метициллинорезистеных штаммов составила 61%. Биоматериал забирался у пациентов, перенесших операции на сосудах сердца. В результате, наибольшее количество S.epidermidis выделено из раневого отделяемого-65%, из них 80% с метициллинрезистентностью. Из смывов трахеобронхиального дерева-35%, со 100% метициллинрезистентностью. Анализ микрофлоры госпитальной среды показал, что эпидермальные стафилококки составили 87%, из них 29%MRSE. Среди сотрудников высеваемость MRSE составила 12,5%. Определялась устойчивость метициллинрезистентных стафилококков к дезинфекционным средствам и антисептикам: действующее вещество частично аммониевые соединения (ЧАС) и ЧАС с перекисью водорода. Выявлено, что все 100% тестируемых штаммов S.epidermidis MRSE устойчивы к дезинфекционным средствам, используемым в нашем стационаре для текущей дезинфекции в концентрации 0,25%, а в концентрации 0,5% -все штаммы чувствительны. Среди антисептиков, неэффективных не оказалось. При изучении резистентности к антибиотикам выделенных штаммов S.epidermidis получены следующие результаты: в 100% случаев штаммы чувствительны к линезолиду и тигециклину. К ванкомицину чувствительно 91,7% штаммов. К гентамицину резистентны 62,5% штаммов резистентны. К линкозамидам (линкомицин, клиндамицин) резистентность составила 56%. Из фторхинолонов, к моксифлоксацину чувствительно 68%, к левофлоксацину-31% штаммов. Выводы: Таким образом, S.epidermidis освоили нозокомиальную среду и превратились в возбудителя заслуживающего особого внимания, что подтверждается результатами нашего исследования, в котором установлено почти двукратное преобладание метициллинрезистентных клинических штаммов и одна треть метициллинрезистентных штаммов, изолированных с объектов окружающей среды. В ходе исследования чувствительности к антибиотикам было выявлено, что наиболее эффективными антибактериальными препаратами в отношении штаммов, изолированных в нашем стационаре, оказались линезолид, тигециклин и ванкомицин.

Комментарии посетителей

Комментарии могут отправлять участники данного мероприятия или члены Ассоциации.
Преимущества членства в ассоциации

Чувствительность антибиотикорезистентных коагулазонегативных стафилококков к антисептику пиклоксидину

Обложка

Актуальность. Коагулазонегативные стафилококки (КНС), в первую очередь Staphylococcus epidermidis, преобладают в нормальной микрофлоре глаза. Вследствие нерациональной антибиотикотерапии среди КНС широко распространяются резистентные штаммы.

Цель — изучить чувствительность антибиотикорезистентных изолятов КНС к антисептику пиклоксидину.

Методы. Для 39 изолятов бактерий, полученных из посевов проб с конъюнктивы, определены видовая принадлежность, чувствительность к антибиотикам и антисептику пиклоксидину. Методом электронной микроскопии исследована морфология клеток при воздействии антисептика.

Результаты. Охарактеризованы 33 изолята S. epidermidis (17 чувствительных или устойчивых к препаратам не более 2 классов антибиотиков и 16 полирезистентных), 2 — Staphylococcus haemolyticus (1 устойчивый к 2 классам антибиотиков и 1 полирезистентный), 3 — Staphylococcus hominis (1 чувствительный и 2 полирезистентных), 1 — Staphylococcus caprae (полирезистентный). В тестах in vitro антисептик пиклоксидин показал высокую эффективность в подавлении роста стафилококков независимо от их чувствительности к антибиотикам, а также бактерицидную активность при концентрациях 15,6–31,2 мкг/мл, близких к таковым для хлоргексидина. В этой концентрации антисептик обладал деструктивным действием на поверхностные структуры клеток бактерий.

Заключение. Антисептик пиклоксидин одинаково эффективен в отношении антибиотикочувствительных и резистентных коагулазонегативных стафилококков.

Ключевые слова

Полный текст

АКТУАЛЬНОСТЬ

Коагулазонегативные стафилококки (КНС), в норме колонизирующие всю поверхность кожи человека, долгое время принято было рассматривать как бактерии-комменсалы [1], которые не продуцируют факторы патогенности, характерные для коагулазопозитивного Staphylococcus aureus, и имеют ограниченное значение для клинической практики. Однако в последнее время бактерии этой группы стали привлекать повышенное внимание, что обусловлено установлением роли КНС в качестве резервуаров генов резистентности к антибактериальным препаратам и ведущих возбудителей нозокомиальных инфекций [2].

Микрофлора конъюнктивы схожа с микрофлорой верхних дыхательных путей и кожи и представлена в основном грамположительными бактериями, среди которых преобладают КНС [3]. Считается, что наряду с позитивной ролью, которая заключается в том, что КНС и их основной вид Staphylococcus epidermidis предотвращают колонизацию конъюнктивы более патогенным S. aureus [4], эпидермальный стафилококк становится одним из наиболее частых возбудителей оппортунистических инфекций глаза — конъюнктивита, кератита и эндофтальмита [3, 5, 6].

У конъюнктивальных штаммов S. epidermidis вследствие нерациональной антибиотикотерапии наблюдается широкое распространение генов резистентности [7–9]. В глазной хирургии это является серьезной проблемой при ведении больных с интравитреальными инъекциями [10, 11]. Многократные курсы местных глазных антибиотиков в качестве периоперационного метода профилактики способствуют развитию резистентности микрофлоры конъюнктивы и повышают риск возникновения не поддающихся антибиотикотерапии постинъекционных инфекционных осложнений [11].

У пациентов с резистентной микрофлорой конъюнктивы наблюдается также резистентность бактерий в носоглотке [7]. В литературе описаны случаи не поддающейся антибиотикотерапии пневмонии с высоким процентом смертельных исходов у больных с частым использованием местных глазных антибиотиков в анамнезе [12].

В операционной при проведении интравитреальных инъекций для стерилизации глазной поверхности в течение 30 сек проводят ее орошение 5% раствором антисептика повидон-йода [13], а у больных с чувствительностью к повидон-йоду — 0,05% хлоргексидином [14] — антисептиком из группы бигуанидов. В качестве профилактических курсов антибактериальных препаратов до и после интравитреальных инъекций до недавнего времени обычной практикой являлось назначение антибиотиков местного действия в форме глазных капель [11]. В последние годы нецелесообразность подобных профилактических курсов антибиотиков получает подтверждение во многих исследованиях [11, 15]. По нашим данным [15], у пациентов, получивших 20 и более интравитреальных инъекций и сопутствующих курсов антибиотикотерапии, наблюдается двукратное увеличение содержания полирезистентных изолятов в составе микрофлоры конъюнктивы, а процент изолятов, резистентных к применяемому антибиотику, достигает 90%.

При инфицировании конъюнктивы резистентными штаммами альтернативой антибиотикам может стать применение местных глазных антисептиков. Наряду с антисептиками повидон-йодом и хлоргексидином, которые применяются в глазной хирургии только в операционной, антисептик из ряда бисбигуанидов пиклоксидин (N,N’’-бис[[(4-хлорфенил)амино]иминометил]-1,4-пиперазиндикарбоксимидамид дигидрохлорид) выпускается в форме глазных капель (0,05%, 500 мкг/мл пиклоксидина дигидрохлорид). Пиклоксидин показан при инфекциях, вызываемых S. aureus, Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Eberthella typhosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Shigella dysenteriae, Bacillus subtilis, Chlamydia trachomatis. Однако, несмотря на ведущую роль КНС в инфекциях конъюнктивы, бактерицидные свойства пиклоксидина в отношении КНС не описаны; неизвестно так же, как влияет антибиотикорезистентность стафилококков на их чувствительность к данному антисептику.

Цель исследования — изучить чувствительность антибиотикорезистентных изолятов КНС к антисептику пиклоксидину.

МЕТОДЫ

В исследование включены 39 изолятов КНС, полученных из посевов проб с конъюнктивы пациентов ФГБНУ «НИИ глазных болезней». Пробы с конъюнктивы выполнялись с помощью стерильных одноразовых тампонов по стандартной методике (от латерального угла глаза к медиальному) в нижнем своде конъюнктивы на транспортную систему со средой Эймса. Забор материала осуществлялся таким образом, чтобы контакт с ресницами и кожей век был по возможности минимизирован.

Методы исследования

Пробы пересевали на среду агар Мюллера-Хинтон (Россия, Оболенск) и Columbia агар (Becton Dickinson, Франция) с добавлением 5% бараньей крови. При наличии роста определяли видовую принадлежность выделенного микроорганизма и чувствительность к антибиотикам с помощью автоматизированного бактериологического анализатора BD Phoenix 100.

Подавление роста бактерий в присутствии пиклоксидина изучали микрометодом серийных разведений антисептика в жидкой питательной среде. Выращивание культур проводили в течение 24 ч на агаре Columbia (Becton Dickinson, Франция) с добавлением 5% бараньей крови и суспендировали в фосфатном буфере (PBS, pH 7,4) до показателя мутности 0,5 МакФарланда. По 20 мкл суспензий вносили в 200 мкл триптиказо-соевого бульона (TSB; Becton Dickinson, Франция) без добавок или с добавлением пиклоксидина в конечных концентрациях 250, 125, 62,5, 31,2 и 15,6 мкг/мл. Культуры выращивали в стерильных 96-луночных планшетах при 37°С. О росте изолятов судили по увеличению оптической плотности культур, которую регистрировали при 490 нм с помощью Perkin Elmer Wallac 1420 Multilabel Counter в начальный момент времени, при внесении бактерий в жидкую питательную среду, а также через 24 и 96 ч роста.

Исследование морфологии клеток бактерий при воздействии антисептика пиклоксидина проводили методом электронной микроскопии с помощью двухлучевого сканирующего ионно-электронного микроскопа Quanta 200 3D (FEI Company, США). Материал агаровых (Columbia agar) культур изолятов суспендировали (до показателя мутности 2,0 МакФарланда) в фосфатном буфере (PBS, рН 7,4) без антисептика с 31,2 мкг/мл или 500 мкг/мл пиклоксидина; инкубировали при комнатной температуре в течение 15 или 60 мин; центрифугировали при 6000 об./мин в пробирках типа эппендорф; ресуспендировали в 1 мл дистиллированной воды, добавляли 2 мл формалина, выдерживали сутки при 4°С и центрифугировали. Осадок наносили на кремниевую подложку, высушивали под восходящим ламинарным потоком стерильного воздуха. Образцы не подвергали дегидратации и напыляли электронопроводящим слоем золота толщиной 5 нм (проба Au999) при помощи модуля для напыления SPI-MODULE Sputter Coater (SPI Supplies, США), затем изучали с помощью двухлучевого сканирующего ионно-электронного микроскопа Quanta 200 3D (FEI Company, США). Исследование проводили в условиях высокого вакуума при ускоряющем напряжении 5,0–10,0 kV. Рабочие увеличения — от 300 до 40 000.

Статистический анализ

Статистический анализ данных проводили в пакете программ Statistica 10.0. Для непрерывных нормально распределенных данных в качестве описательной статистики приводили среднее и стандартное отклонение, для порядковых и качественных — количество данных и проценты. Для сравнения нескольких групп (>2) применяли тест ANOVA, для сравнения двух — двусторонний t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони на множественные сравнения. Различия в группах считали достоверными при уровне значимости меньше 5% (p<0,05) для соответствующих критериев.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Видовой состав и чувствительность к антибиотикам конъюнктивальных изолятов

Среди 39 исследованных изолятов КНС определены 33 S. epidermidis (из них 2 чувствительных к антибиотикам, 15 устойчивых не более чем к 1–2 препаратам из разных классов антибиотиков и 16 полирезистентных), 2 S. haemolyticus (1 устойчивый к 2 классам антибиотиков и 1 полирезистентный), 3 S. hominis (1 чувствительный и 2 полирезистентных), 1 S. caprae (полирезистентный). Чувствительность к антибиотикам конъюнктивальных изолятов приведена в дополнительных материалах.

Влияние пиклоксидина на рост стафилококков в жидкой питательной среде

В табл. 1 приведены параметры роста культур стафилококков, чувствительных или резистентных не более чем к 1–2 антибиотикам разных классов, и полирезистентных изолятов, без и с добавлением пиклоксидина.

Влияние антисептика пиклоксидина на рост коагулазонегативных стафилококков в жидкой питательной среде

Читайте также: